1 菌落總數檢測板原理及適用范圍
菌落總數是指樣品經過處理,在一定條件下培養后所得1 mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數,是zui常用的微生物檢測項目。菌落總數檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品,含有標準的營養培養基,吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑(TTC),菌落在檢測板上呈紅色,這樣可縮短計數時間和增強計數效果。本產品適合于各類食品及食品原料中菌落總數的測定。執行標準:《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》(GB 4789.2)。
2 菌落總數檢測板操作方法
2.1 樣品處理:取樣品 25 mL(g)放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液(或生理鹽水)的取樣罐或均質袋內,制成1:10的樣品勻液,必要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6~7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL,注入含有9 mL稀釋液的試管內,振搖后成為1:100的樣品勻液,以此類推,做出1:1000等稀釋度的樣品勻液,每次換一支吸管。
2.2 接種:一般食品選2~3個稀釋度進行檢測,含菌量少的液體樣品(如飲用純水和礦泉水等)可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數檢測板置于平坦實驗臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內,迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板,讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上,靜置10s左右,待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
2.3 培養:將檢測板疊在一起,倒置于恒溫培養箱內。一般食品培養溫度為36℃±1℃,培養15~24 h;水產品培養溫度為30℃±1℃,培養48 h。
3 結果判讀
細菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點,選擇菌落數適中(30~300 CFU)的檢測板進行計數,乘以稀釋倍數后即為每毫升(或每克)樣品中所含的細菌菌落總數。
4 附加說明
4.1 菌落總數檢測板檢測結果與傳統平板計數瓊脂平板法符合率可達90%以上。
4.2 磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌:貯存液:稱取34.0 g分析純磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于500 mL蒸餾水或純凈水中,用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉(NaOH)溶液調節PH至7.2,用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25 mL,用蒸餾水稀釋至1000 mL,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15 min,或放入消毒碗柜中消毒。
4.3 生理鹽水的配制與滅菌:取8.5 g分析純氯化鈉(NaCl)溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15 min,或放入消毒碗柜中消毒。
4.4 注意使用過的檢測板上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。
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