1 原理及適用范圍
糞鏈球菌普遍存在于水環境中,為條件致病菌,它來源于人和溫血動物的糞便,可以在水中存活很長時間,引起人類疾病。是水體受到糞便污染的重要指標菌,更能客觀的反映水質衛生狀況。中華人民共和國城鎮建設標準在對城市供水、飲用水水質監測中增加了水中糞鏈球菌的檢測指標。糞鏈球菌檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品,含有標準的營養培養基,冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑(TTC),菌落在檢測板上呈紅色帶黃暈斑點。本產品適合于生活飲用水、生產加工用水及食品中糞鏈球菌的測定。執行標準:國家標準《飲用天然礦泉水檢驗方法》(GB/T 8538);《中華人民共和國城鎮建設行業標準》(CJ/T 141~150);《中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準》(SN/T 1933.1)。
2 微生物糞鏈球菌檢測板?操作方法
2.1 水樣品檢測
2.1.1 水樣過濾:將滅菌的過濾裝置連接到抽濾瓶上,用滅菌鑷子夾取直徑47 mm~50 mm,孔徑為0.45μm的滅菌濾膜,放在濾器底部,旋緊蓋子,將250 mL水樣注入濾器中抽濾。
2.1.2 揭開檢測板上層膜,在檢測板紙片上加1 mL無菌水濕潤后,迅速用無菌鑷子將過濾水樣的濾膜移放在檢測板紙片上(濾膜截留細菌面向上),濾膜與紙片之間不要夾留著氣泡,貼好上層膜。
2.2 食品樣品檢測
2.2.1 取25 g(或25 mL)樣品放入裝有225 mL生理鹽水的均質袋中,以8000 r/min均質1~2 min,制成1:10樣品均液,根據樣品污染程度及檢驗需要,可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液。
2.2.2 將糞鏈球菌檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開,用無菌吸管吸取1 mL樣品稀釋液均勻滴加到紙片上,迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板,靜置10 s左右,待樣品稀釋液*被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復。
2.3 培養:將檢測板疊在一起,倒置于恒溫培養箱內,36℃±1℃,培養15~24 h。
3 微生物糞鏈球菌檢測板?結果判讀
在檢測板(濾膜)上生長的紅色帶黃暈的斑點即為糞鏈球菌陽性,若紙片上的紅色斑點無黃暈則為糞鏈球菌陰性。
4 計數原則及報告方式
4.1 濾膜過濾水樣:以濾過一張無菌濾膜后產生的菌落數計算,選擇菌落數在20~100CFU的檢測板進行計數后即為250 mL水樣品中所含的菌落總數。結果以CFU/250 mL為單位報告。
4.2 食品樣品計數
4.2.1 以生長有30~300CFU的檢測板為計數適宜范圍。
4.2.2 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在計數合適范圍30~300CFU之間,則計算兩個檢測板菌落數的平均值,再乘以相應的稀釋倍數,作為每克(毫升)中菌落總數結果。
4.2.3 若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內時,按式(1)計算:
∑C
N= ———————— •••••••••••••••••••(1)
(n1+0.1n2)d
式中:
N——樣品中糞鏈球菌菌落數;
∑C——兩個連續稀釋度檢測板(含適宜范圍菌落數的檢測板)糞鏈球菌菌落之和;
n1——適宜范圍菌落數的*個稀釋度(低)檢測板個數
n2——適宜范圍菌落數的第二個稀釋度(高)檢測板個數
d——*稀釋度的稀釋倍數
示例:
4.2.4 若所有稀釋度檢測板上均無菌落生長,則以小于1/d(d—zui低稀釋倍數)計算。
4.2.5 低數值的估算:如果實驗樣品原液(水及液體飲料)或初始稀釋懸液(其他樣品)的兩個檢測板上的菌落數均小于30CFU,計算兩個檢測板上的菌落數的平均數。計算式(2):
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••(2)
nd
式中:
NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值;
∑C——兩個檢測板上菌落數的和;
n——檢測板的數量;
d——樣品初始懸液或實際接種懸液的稀釋倍數。
4.2.6 大數值的估算:若所有稀釋度的檢測板上菌落數均大于300CFU,計數zui接近300CFU的檢測板上的菌落并計算出平均數,其他檢測板可記錄為多不可計。結果計算式(3):
∑C
NE = —— •••••••••••••••••••(3)
nd
式中:
NE——每毫升或每克樣品中菌數的估算值;
∑C——兩個檢測板上菌落數之和;
n——檢測板的數量;
d——與樣品懸液相*的稀釋倍數。
5 結果報告
固體樣品以CFU/g為單位報告,液體樣品以CFU/mL為單位報告。
6 附加說明
注意使用過的檢測板上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進行處理。
聯系人:陳先生 手機:15989223335 傳真: 地址:廣州市高新技術產業開發區科學城開源大道11號A2棟第三層